蛋白质是生物细胞和组织的重要组成部分，生物体的一切生命活动都离不开蛋白质的参与。蛋白质是生命的物质基础，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的主要承担者。生物材料中蛋白质含量的测定是生物研究中最重要和最基本的实验操作之一。目前常用的测定方法有考马斯亮蓝法(Bradford法)、紫外吸收法、双缩脲法(Biret法)、福林-酚试剂法(罗瑞法)、二喹啉甲酸法(BCA法)和凯氏法。每种方法的原理和操作都不同，各有其优点和局限性。
本文介绍了考马斯亮蓝法即布拉德福法测定蛋白质含量。它是一种用染色法测定溶液中蛋白质浓度的方法，是目前最快速、可靠、灵敏的蛋白质测定方法之一。
实验原理：
布拉德福蛋白质法是根据蛋白质与染料结合的原理设计的。考马斯亮蓝染料(G-250)在酸性溶液中与蛋白质的碱性氨基酸和芳香族氨基酸残基结合，使染料的最大光吸收峰位置由465nm变为595nm，溶液颜色由棕红色变为蓝色，反应快速稳定。形成的化合物颜色深浅在一定范围内与蛋白质浓度成正比。因此，通过测定组合染色后溶液在595nm处的吸光值，可以计算出溶液中蛋白质的含量。
用分光光度计测量已知浓度的标准蛋白质溶液在595nm波长处的吸光度A595，并绘制标准曲线。然后，在595nm波长下测量同一染色的待测蛋白溶液的吸光度值，根据标准曲线即可计算出待测蛋白的浓度。
实验设备：
分光光度计(例如标记为DEN-600的小型光度计)
涡流混合器
试管和试管架
塑料/玻璃试管
微量吸移管
主溶液/试剂：
标准蛋白溶液：牛血清白蛋白(BSA)可用作标准蛋白。配制1.0毫克/毫升标准蛋白溶液，储存于4。
考马斯亮蓝G250染料试剂：称取100 mg考马斯亮蓝G250，溶于50ml 95%乙醇中，加入120ml 85%磷酸，最后加入去离子水将试剂稀释至1L。
待测蛋白质溶液
实验操作：
不同浓度蛋白质标准溶液的配制：可用7支普通洁净试管，从1号试管中取0.1mL去离子水作为空白组，在2-6号移液管中分别加入1.0mg/mL BSA溶液0.02、0.04、0.06、0.0010-330.0。
加入染色试剂：用移液管或移液管分别向上述试管中加入3.0mL考马斯亮蓝G250试剂，用涡旋混合器轻轻快速混合均匀；
比色法：考马斯亮蓝试剂与蛋白质结合迅速，2-5分钟即可完成，1小时内保持稳定，故吸光值A595溶液静置5分钟后，在分光光度计上于595nm波长处测定每支试管溶液的吸光度；
比色时最好用玻璃或塑料比色皿，不要用应时或硅胶比色皿，因为考马斯亮蓝染料易与应时或硅胶材料结合附着，不易洗涤染色。
比色完成后，及时用清水洗净，然后用40%的乙醇润湿去除颜色，最后用清水洗净。
如果使用塑料比色皿，用乙醇清洗的时间不能太长，也绝对不能长时间浸泡在乙醇或丙酮中，因为会导致塑料比色皿膨胀变形。
制作标准曲线：以标准蛋白溶液的浓度(mg/mL)为横坐标，吸光度值A595为纵坐标，通过线性拟合得到标准曲线；
计算待测蛋白的浓度：将分光光度计测得的蛋白溶液吸光度A595与标准曲线比较，计算待测蛋白的浓度。
典成DEN-600光度计是一款小巧便携、电池供电的光度计，可以方便地放置在生物安全柜和培养箱中。该设备可容纳10毫米光程的标准比色皿、普通圆底试管或离心管。USB连接和DEN软件可用于数据传输、数据处理和计算。600 nm波长的光学系统可设计用于测量细胞总数(OD600)、浊度测量(McFarland单位)和蛋白质浓度测量(Bradford蛋白质方法)。这些领域通常使用分光光度计，因此DEN-600可以作为分光光度计的廉价替代品。
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